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RNA提取多见疑问总结
发布人:viking2000    看下 1810 次    时间:2012年12月19日    
一、提取进程中RNA降解  
1、作品中的RNA出现降解 
最好是选择新鲜的作品,作品采集后应高效用液氮处理。 
型材留能有液氮中或-80℃情况下,型材均不可长久留存,且避免反复冻融。 
幼嫩新鲜的型材RNA质量高且完整,老化或病虫害等受损的型材中RNA降解比较严重。
2、操作执行气体的RNase感染 
RNA提取最好是选择洁净的气体,由于天然情况下气体中富含较多的RNase,建议对提取气体进行RNase的除处理。 
3、提取日常用具带来的RNase感染 
提取用大多数的玻璃器皿可经过低温灭活(160℃烘烤4-5 h)消除RNase。 
RNA作品所接触的大多数塑料成品(如枪头、电泳槽、移液器等都需要遵照DEPC或NaOH处理严格消除RNase后才可运用 
4、RNA消融用水带来的RNase感染 
产DEPC处理水时需强烈共鸣使DEPC与水充分接触副作用(DEPC与水副作用后会诞生产品品牌的气体,用塑料膜将瓶口扎紧,强烈混匀后遵照瞟塑料膜是不是胀气来判断副作用是不是充分)。 
DEPC处理后应避光静置过夜,高压抗菌。 
5、操作执行中带入的RNase感染 
任何皮肤、汗和呼出的气体中富含产品品牌的RNase。操作执行人员可经过喜欢顶替一次性袜,佩戴口罩等方法避免这款感染。 

二、RNA提取量低 
型材RNA质量较低 
对于RNA质量较低的表皮构造(肌肉构造或表皮素较高的动物构造)可足够除起始型材的用量。 
型材中热量和氨基酸质量较高 
热量和氨基酸质量较高的型材用饱和烃对上清好好抽提。  
RNA积聚情况不合适 
使用异丙醇积聚RNA中,加入的异丙醇与提取液的几率为严格的1 :1 ,要不会比较常见影响RNA积聚的效率和RNA的纯度。特别型材(如含有多糖、多酚等)可经过增加足够的柠檬酸钠来除积聚效果。 
RNA中有基因组DNA 感染 
型材中氨基酸质量高 
扁桃体、胸腺等构造中的氨基酸质量较高,可进行多次酚饱和烃抽 
提以消除中性的DNA。奖金以在提取后加入DNase处理,降解DNA 。 
RNA积聚情况不合适 
使用异丙醇积聚RNA中,加入的异丙醇与提取液的几率不低溶胶的pH值不是很大,都容易使DNA引起积聚。 
提取后的RNA作品降解
RNA作品反复冻融 
反复冻融会使RNA片断爆,影响RNA的无缺性。 
RNA作品留存情况不合适 
遵照留存时间和型材的不同RNA应留能有不同的溶胶中。如从胰脏、贲门等RNase质量较高的型材中提取的作品需要储能有阿尼林或甲酰胺中以留存高质量的RNA,而在扁桃体中提取的RNA可在水中长时刻高兴留存。,
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发布人:viking2000 发布时间:2012年12月19日已被看下 1810
 
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