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热量表达多见疑问总结
发布人:viking2000    看下 3796 次    时间:2012年12月19日    
      影响热量表达有很多情况,如目的热量本身的特色,表达载体、表达菌株的并,诱发表达的情况,培养基的选择等,都有容易对热量的表达诞生影响。针对热量表达中的一些多见疑问,可初使用如下方法加以处理。 

一、热量不表达或表达量过低 
1.选择准确的表达载体与表达菌株 
       利用T7 打开子的载体(如pET 系列载体)应使用BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、Rosetta(DE3) 等菌株不是利用T7 打开子的表达载体(如带有tac 打开子的pGEX、pMal 系列表达载体)应使用BL21 表达菌株。  
       对组织细胞有害有毒性的热量,应该使用配景表达低、綦严调节诱发的菌株,如BL21(DE3)pLysS 菌株。 对于带有奇特密暗码的热量或来历于真核变异的热量,应该使用Rosetta(DE3) 等菌株。 
2.初试不同的表达系统与菌株 
      不同的热量,对不同载体与菌株的偏好不同,如果某一表达系统不容易遵照更新诱发表达情况得到比较常见除,可以顶替其它的菌株或表达载体。 
3.表达情况的更新 
      选择不同的培养基。对于不少热量,在培养基中加入足够的葡萄糖(0.1%~0.5%),可以比较常见除表达量。 
      较高的温度、较高的诱发物浓度、较长的表达时间,一般可以加快表达的高效,影响目的热量的积聚,从而除表达量。但是容易会避免可溶热量的表达量,引起包涵体。 
      菌体的生长状况对热量表达有很大的影响,可以遵照测算菌液的OD 值监测生长状况。对于大有些热量,应在菌液的底数生长时刻(OD ≈ 0.5)进行诱发。 

二、目的热量不可溶,引起包涵体 
      首先来说下,核实目的热量是不是有表达。裂化菌体并离心后,遵照对全菌、上清、积聚的检测,核实目的热量是不是表达,还是引起了包涵体。 
      包涵体的引起与热量本身结构、表达系统、诱发表达情况等情况有容易有密切关系。在不容易发生热量本身结构的状况下,可以初试不同的表达系统与菌株,提高其消融能力,更新出适合特定热量的表达系统。 
      目前觉得包涵体的引起是利用热量在菌身体积聚高效过快,没有准确插而堆积积聚。可以遵照更新诱发表达情况,抗击热量的积聚。如:避免诱发温度、避免诱发物浓度、缩短表达时间、避免诱发时菌液的OD 值。
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发布人:viking2000 发布时间:2012年12月19日已被看下 3796
 
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