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克隆多见疑问总结
发布人:viking2000    看下 1768 次    时间:2012年12月19日    
一、克隆效率低  
      影响克隆效率有很多情况,如扩增目的变异所用引物,变异的结构,插入片断和载体的几率等。如看到克隆效率低,尝使用下列方法改善克隆效率。 
  • 纯化PCR 产品。
  • 如插入片断的浓度太低,增加插入片断的量。
  • 用新鲜的PCR产品,不必冷却PCR 产品。由于3’-A 地理学不安稳,产品应放置在4℃,曾经在1~2天内达到克 隆副作用。 
  • 使用能诞生3’ 末尾 “A”的DNA聚合酶 (例如 Taq DNA 聚合酶)。 
  • 从新生产引物,5’ 端含有“G”或“C”,以改善PCR 产品3’ 末尾“A”的效率。 
二、PCR 看重组子失败 
      当用PCR 方法看重组子,没有得到目的扩增产品,又没有载体自连,说明书PCR副作用失败。从新更新PCR 副作用情况或提取质粒,以质粒作模板扩增或酶切看含有重组子的克隆。

三、重组克隆呈现淡苹果绿或“fish eye”  
     这是由于插入片断没有影响lacZ 变异读码框, 或插入片断太小,这种状况下好气性微生物呈现淡苹果绿。
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发布人:viking2000 发布时间:2012年12月19日已被看下 1768
 
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