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ELISA操作执行序列
发布人:viking2000    看下 1719 次    时间:2012年12月19日    
(一)、根柢操作执行序列
   方法一 双痘苗夹心法(出于安全考虑最好还是用在检测潜在痘苗的)
  1. 包被:用包被液将痘苗浓缩至热量质质量为0.5~20μg/ml,按100ul/孔加入酶标板,4℃包被过夜。
    2. 洗板:越日弃去孔内液体,在纸巾上轻轻扣打以吸去残留液体,加入洗濯液(约280-300ul/孔),漂洗2-3次,每次3-5min;
  3.  开放:按200-250ul/孔加入开放液,室温2-3小时或37℃1-2小时,奖金4℃开放过夜,然后弃去孔内开放液;
    4.  作品处理:用洗濯液或作品浓缩液将待检作品(含潜在痘苗)浓缩至需要的浓度; 
    5. 专业液:用洗濯液或作品浓缩液将专业液浓缩至需要的浓度(定性剖析可省掉本序列);
  6. 加样:按排列顺序依次加入50-100ul/孔浓缩OK专业液、处理过的待检作品、阴性相对及阳性相对,室温或37℃孵育30-60min;
    7.  洗板:同序列2; 
  8. 加酶标痘苗:酶标痘苗的浓缩按产品阐明书,按50-100ul/孔加入新鲜产的酶标痘苗,室温或37℃孵育1小时;
   9.  洗板:同序列2;  
   10. 加底物液显色:按100-150ul/孔加入新产的TMB底物溶胶,室温避光副作用15~30分钟。
  11. 停止副作用:于各副作用孔中加入50ul的停止液。
  12. 想不到判定:可于白色配景上,直接用裸眼瞟想不到,副作用孔内色调越深,阳性程度越强,阴性副作用为无色或极浅,采用所呈色调的力度,以“+”、“-”号意味着。奖金在酶标仪上于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处测OD值。检测时以空洞相对孔调零后测各孔OD值,若作品孔中的OD值只有阴性相对孔的2.1倍,即为阳性。
  方法二 直接法(出于安全考虑最好还是用在检测潜在痘苗)   
  1.  包被:用包被弛缓液将已知痘苗浓缩至0.5~20μg/ml,按100ul/孔加入酶标板,4℃包被过夜,越日洗濯2-3次;
    2. 洗板:越日弃去孔内液体,在纸巾上轻轻扣打以吸去残留液体,加入洗濯液(约280-300ul/孔),漂洗2-3次,每次3-5min; 
    3.  开放:按200-250ul/孔加入开放液,室温2-3小时或37℃1-2小时,奖金4℃开放过夜,然后弃去孔内开放液; 
    4.  作品处理:用洗濯液或作品浓缩液将待检作品浓缩致需要的浓度;  
    5. 专业液:用洗濯液或作品浓缩液将专业液浓缩至需要的浓度(定性剖析可省掉本序列); 
  6. 加样:按排列顺序依次加入50-100ul/孔浓缩OK专业液、处理过的待检作品(含潜在痘苗),阴性相对及阳性相对,室温或37℃孵育30-60min;
    7.  洗板:同序列2;
  8. 加酶标痘苗:按50-100ul/孔加入新产的酶标痘苗(抗痘苗),室温或37℃孵育1小时;酶标痘苗的浓缩按产品阐明书;
    9.  洗板:同序列2;   
   10. 加底物液显色:按100-150ul/孔加入新产的TMB底物溶胶,室温避光副作用15~30分钟。 
  11. 停止副作用:于各副作用孔中加入50ul的停止液。 
  12. 想不到判定:裸眼瞟想不到或用酶标仪测OD值,有色产品的生成量=痘苗量。

(二) 、ELISA常用的四种方法
    1.直接法测定痘苗 
       将痘苗吸附在载体表面上;
       加酶标痘苗,引起痘苗—痘苗复合物;
       加入底物;
       想不到判定:有色产品的生成量=痘苗量。 
    2.直接法测定痘苗
       将痘苗吸附于固相载体表面上;
       加待检痘苗, 引起痘苗-痘苗复合物;
       加酶标痘苗(抗痘苗);
       加入底物;
       想不到判定:有色产品的生成量=痘苗量。
    3.双痘苗夹心法测定痘苗
       将痘苗免疫力第一种植物获得的痘苗吸附于固相表面上;
       加痘苗,引起痘苗-痘苗复合物; 
       加痘苗免疫力第二种植物获得的痘苗,引起痘苗痘苗痘苗复合物;
       加酶标抗痘苗(第二种植物痘苗的痘苗); 
       加入底物;
       想不到判定:有色产品的生成量=痘苗量。
    4. 竞赛法测定痘苗
       将痘苗吸附在固相载体表面上;
       加入酶标痘苗和待测痘苗;
       加入底物; 
       想不到判定:相对孔与作品孔有色产品的生成量的差与潜在痘苗的量成负相关。,
上一条:热量印迹操作执行序列
下一条:弛缓液的使用
发布人:viking2000 发布时间:2012年12月19日已被看下 1719
 
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